2.4 小鼠滑膜组织中CD31、VEGF蛋白表达水平检测

    采用免疫组织荧光法检测。于无菌环境下各组取6只小鼠的右踝关节内滑膜组织，石蜡包埋，切片(厚度：5 μm)。参照相应抗体说明书要求，分别将滑膜组织切片与CD31抗体(1 ∶ 100)或VEGF抗体(1 ∶ 500)置于含有1%马血清、0.5%Triton X-100的PBS中，于4 ℃孵育过夜；切片以PBS洗涤后，置于驴抗小鼠二抗(1 ∶ 500，对应CD31)或驴抗兔二抗(1 ∶ 500，对应VEGF)中，于37 ℃避光孵育2 h；以PBS洗涤后，于荧光染色剂DAPI溶液(1 ∶ 1 000)中避光孵育5 min；PBS洗涤，稀甘油封片。在显微镜下进行拍照，每张切片选取5个不重叠区域，镜下观察，以绿色荧光判断为目标蛋白阳性染色。采用 Image-Pro Plus 7.0软件分析CD31蛋白阳性染色的单位面积光密度值(OD/μm2)和VEGF蛋白阳性染色面积占总面积的比值(%)，用来表示目标蛋白表达水平。试验重复6次。

    2.5 小鼠滑膜组织中NF-kB、GATA4蛋白表达水平检测

    采用Western blotting法检测 ......